PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.

• iELISA bovine enzyme-linked immunosorbent assay Enzootic bovine leukosis diagnosis control cattle

Abstract in Portuguese:

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo “bovine leukemia virus” (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis “lung” (Tb1Lu) livre de “bovine viral diarrhea virus” (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens “fetal lamb kidney” (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial “Chekit Leucose-Serum”. Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA “Chekit Leucose-Serum”, o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.

• iELISA bovinos ensaio de imunoadsorção enzimática leucose enzoótica bovina diagnóstico controle

Abstract in English:

Goat farming in the Northeast region of Brazil plays an important socioeconomic and strategic role. The rusticity of this activity in this region, allied with its rapid expansion in other states, has caused losses in its production chain in regional and national levels, caused by infectious diseases, especially caseous lymphadenitis (CL), a widespread goat herds disease which has been causing serious economic loss to this activity. Although CL has been detected as an endemic problem in the Brazilian Northeast, a comprehensive and more recent analysis of this prevalence in Brazilian goats is necessary. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Corynebacterium pseudotuberculosis antibodies in five of nine states of the northeast region of Brazil. Serum samples were collected from 2571 goats from 218 farms in five states in the Northeast region of Brazil, collected between 2010 and 2012. The diagnosis of C. pseudotuberculosis infection was made using the ELISA-indirect technique. In 88.5% (193/218) of the investigated properties, at least one goat was seropositive for C. pseudotuberculosis, suggesting that the agent is widespread in Northeast herds, with the highest prevalence found in Rio Grande do Norte (94.5%) and the lowest one in the state of Sergipe (70.3%). A total of 783 (30.45%; 95% CI = 28.71-32.26%) seropositive goats were found, and the highest prevalence among animals was found in Piauí (41.4%) and the lowest in the state of Sergipe (22.5%). Out of a total of 279 breeding herds, 106 (37.99%) were seropositive, standing out the Rio Grande do Norte, with a total of 45.30%, and Piauí 46.8% of positive breeding for CL. A total of the 1420 tested matrices, 599 (42.1%) presented positive serology for C. pseudotuberculosis. Among the States, this distribution also remained similar, standing out Rio Grande do Norte with 47.5%, and Piauí with 59.5% of positive matrices for CL. Among 872 young goats evaluated, 78 (8.9%) were seropositive for CL, observing a statistical difference in the frequency of soropositivity obtained between adults and young adults (P<0.001). The necessity to diagnose the disease in goat herds in the Northeast region is reinforced for the possible implementation of disease control programs and more precise measures to manage CL along with goat farmers.

• Serology Corynebacterium pseudotuberculosis infection goats Brazil enzyme-linked immunosorbent ELISA-indirect caseous lymphadenitis bacterioses

Abstract in Portuguese:

A caprinocultura na região Nordeste do Brasil desempenha importante função socioeconômica e estratégica. A rusticidade desta atividade nesta região, aliada a sua rápida expansão em outros estados, tem gerado perdas na sua cadeia produtiva a nível regional e nacional, causadas por doenças infecciosas, destacando-se a Linfadenite Caseosa (LC), afecção amplamente difundida nos rebanhos caprinos, acarretando sérios prejuízos econômicos à atividade. Embora LC tenha sido detectada como um problema endêmico no nordeste brasileiro, uma análise abrangente e mais recente desta prevalência nos rebanhos caprinos brasileiros se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em cinco dos nove estados que compõem a região Nordeste do Brasil. Foram processadas amostras de soro de 2571 caprinos provenientes de 218 propriedades rurais oriundas de cinco estados da região Nordeste do Brasil, coletadas entre os anos de 2010 a 2012. O diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis foi realizado pela técnica de ELISA-indireto. Em 88,5% (193/218) das propriedades investigadas, pelo menos um caprino foi soropositivo para C. pseudotuberculosis, sugerindo que o agente se encontra disseminado nos rebanhos do Nordeste, com a maior prevalência encontrada no Rio Grande do Norte (94,5%) e a menor no estado de Sergipe (70,3%). Foram identificados 783 (30,4%; IC 95%=28,7-32,2%) caprinos soropositivos, com a maior prevalência entre animais encontrada no Piauí (41,4%) e a menor no estado de Sergipe (22,5%). De um total de 279 reprodutores avaliados, 106 (37,9%) resultaram soropositivos, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 45,30%, e Piauí com 46,8% dos reprodutores positivos para LC. Das 1420 matrizes testadas, 599(42,1%) apresentaram sorologia positiva para C. pseudotuberculosis. Entre os estados esta distribuição também se manteve semelhante, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 47,5% e Piauí com 59,5% das matrizes positivos para LC. Entre os 872 caprinos jovens avaliados, 78 (8,9%) foram soropositivos para LC, observando-se uma diferença estatística na frequência de sopositividade obtidas entre os adultos e os jovens (P<0,001). Reforça-se a necessidade do diagnóstico da enfermidade em rebanhos caprinos da região Nordeste para possível implementação de programas de controle da doença e medidas mais precisas no manejo da LC junto aos criadores de caprinos.

• Sorologia infecção Corynebacterium pseudotuberulosis caprinos Nordeste Brasileiro imunoabsorção enzimática ELISA-indireto linfadenite caseosa bacterioses

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pellegrin A.O., Miranda K.L., Figueiredo J.F., Barbosa E.F. & Lage A.P. 2011. The use of enzyme-linked immunosorbent assay and immunoblotting for the detection of Campylobacter fetus immunoglobulins in the cervico-vaginal mucus of female cattle. [Uso do ensaio imunoenzimático e imuno-blotting para detecção de imunoglobulinas contra Campylobacter fetus em muco cérvico-vaginal de fêmeas bovinas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(3):247-254. Embrapa Pantanal, Rua 21 de Setembro 1880, Corumbá, MS 79320-900, Brazil. E-mail: aiesca@cpap.embrapa.br An indirect enzyme-linked immunosorbent assay was developed to detect antigen-specific secretory IgA antibodies to Campylobacter fetus subsp. venerealis in bovine vaginal mucus with a protein extract of the Campylobacter fetus subsp. venerealis by the acid glycine extraction method. Mean optical density measurement (l=450 nm) was 0.143±0.9. The most immunoreactive protein bands of the Campylobacter fetus subsp. venerealis or Campylobacter fetus subsp. fetus recognized by IgA in immunoblotting, using bovine vaginal mucus samples, migrate at 42.6 kDa. The protein that migrates at 93 kDa was recognized exclusively for C. fetus subsp. venerealis. A positive vaginal mucus sample of a cow from negative herd recognized antigens of C. jejuni subsp. jejuni e C. fetus subsp. fetus.

• Campylobacter fetus Campylobacteriosis immunoglobulin A Campilobacteriose imunoglobulina A

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pellegrin A.O., Miranda K.L., Figueiredo J.F., Barbosa E.F. & Lage A.P. 2011. The use of enzyme-linked immunosorbent assay and immunoblotting for the detection of Campylobacter fetus immunoglobulins in the cervico-vaginal mucus of female cattle. [Uso do ensaio imunoenzimático e imuno-blotting para detecção de imunoglobulinas contra Campylobacter fetus em muco cérvico-vaginal de fêmeas bovinas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(3):247-254. Embrapa Pantanal, Rua 21 de Setembro 1880, Corumbá, MS 79320-900, Brazil. E-mail: aiesca@cpap.embrapa.br Foi padronizado um ensaio imunoenzimático do tipo indireto para detecção de imunoglobulina A (ELISA IgA) anti- Campylobacter fetus subp. venerealis em muco cérvico- vaginal bovino utilizando um extrato protéico de Campylobacter fetus subsp. venerealis produzido pelo método de extração ácida pelo tampão de glicina (0,2M; pH2,2). A média dos valores de densidade ótica (DO450) foi de 0,143±0,09. As bandas protéicas dos antígenos de Campylobacter fetus subsp. venerealis e de Campylobacter fetus subsp. fetus melhor reconhecidas pela IgA do muco cérvico- vaginal migraram em 42,6 kDa mas a proteina evidenciada em 93 kDa foi reconhecida exclusivamente pelo Campylobacter fetus subsp. venerealis. Os anticorpos presentes na amostra de muco vaginal testada no “immunoblotting” que apresentou resultado positivo no ELISA IgA, reconheceu antígenos de C. jejuni subsp. jejuni e C. fetus subsp. fetus.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Bauermann F.V., Brum M.C.S., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [A monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to bovine herpesvirus types 1 and 5.] Teste imunoenzimático com base em anticorpo monoclonal para a detecção de anticorpos contra herpesvírus bovinos tipos 1 e 5. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(5):411-417. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Bovine herpesviruses 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are antigenic and genetically related viruses associated with different clinical syndromes in cattle, including respiratory, reproductive, neurological disease and abortion. Epidemiological studies indicate the widespread distribution of both viruses among Brazilian cattle. Serological diagnosis, that allows the identification of latently infected animals, represents an important tool for individual and herd monitoring. The present article describes the standardization of a monoclonal antibody (MAb)-based immunoenzymatic test (ELISA) for detection of antibodies to BoHV-1 and/or BoHV-5. The initial steps involved the determination of the most suitable MAb, the appropriate dilutions of viral antigen and serum samples, and the cut-off value of the assay. After standardization, the ELISA was validated by testing 506 cattle serum samples previously tested for neutralizing antibodies to BoHV-1 and BoHV-5 by virus neutralizing assay (VN). Comparing to the VN for BoHV-1 antibodies, the ELISA presented sensitivity and specificity of 96.6% and 98.3%, respectively. Positive and negative predictive values were 97.6%, the concordance between the tests was 97.6% and the coefficient of correlation k (kappa) was 0.95, demonstrating an excellent correlation. Comparing to the VN for BoHV-5 antibodies, the ELISA presented 94.3% of sensitivity, 97.9% of specificity, 97.1% of positive predictive value, 95.9% negative predictive value, concordance of 96.4% and kappa coefficient of 0.92. These results demonstrate that the ELISA presents suitable specificity and sensitivity to be used for individual and herd serological diagnosis of BoHV-1 and BoHV-5, thus, representing an alternative for VN assays and imported ELISA kits.

• Bovine herpesvirus type 1 bovine herpesvirus type 5 BoHV-1 BoHV-5 herpesvírus bovino tipo 1 herpesvírus bovino tipo 5

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Bauermann F.V., Brum M.C.S., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [A monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to bovine herpesvirus types 1 and 5.] Teste imunoenzimático com base em anticorpo monoclonal para a detecção de anticorpos contra herpesvírus bovinos tipos 1 e 5. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(5):411-417. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Os herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são agentes virais genética e antigenicamente relacionados, associados com diversas manifestações clínicas em bovinos, incluindo doença respiratória, genital, neurológica e abortos. Estudos epidemiológicos indicam que esses vírus estão amplamente disseminados no rebanho bovino brasileiro. O diagnóstico sorológico, que permite identificar animais portadores da infecção latente, se constitui em importante ferramenta para monitoramento individual e de rebanho. O presente artigo relata a padronização de um teste imunoenzimático do tipo ELISA, com base em anticorpo monoclonal (AcM), para a detecção de anticorpos séricos que reagem contra BoHV-1 e/ou BoHV-5. Inicialmente, determinou-se o AcM mais adequado para a sensibilização das placas, as diluições apropriadas do antígeno e dos soros-teste e o ponto de corte do ensaio. Após a padronização, o ensaio foi validado testando-se 506 amostras de soro bovino, previamente testadas para anticorpos neutralizantes contra BoHV-1 e/ou BoHV-5 pela técnica de soroneutralização (SN). Comparando-se com os resultados da SN frente a BoHV-1, o teste de ELISA apresentou sensibilidade e especificidade de 96,6% e 98,3%, respectivamente. Os valores preditivos positivo e negativo foram de 97,6%, a concordância foi de 97,6% e o índice de correlação kappa entre os testes foi de 0,95, o que indica uma excelente concordância. Comparando-se com os resultados da SN frente o BoHV-5, o ELISA apresentou 94,3% de sensibilidade; 97,9% de especificidade; 97,1% de valor preditivo positivo e 95,9% de valor preditivo negativo. Para BoHV-5, a concordância entre os testes foi de 96,4% e o índice de correlação foi de 0,92, também excelente. Esses resultados demonstram que o teste padronizado apresenta sensibilidade e especificidade adequados para o diagnóstico sorológico das infecções por BoHV-1 e BoHV-5 em nível individual e de rebanho. Dessa forma, o ensaio pode se constituir em alternativa para o teste de SN e para os kits de ELISA importados.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho D., Oliveira T.M.F.S., Baldani C.D. & Machado R.Z. 2009. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of IgM antibodies against Leishmania chagasi in dogs. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(2):120-124. Departamento de Patologia Veterinária, Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14870-000, Brazil. E-mail: zacarias@fcav.unesp.br Visceral leishmaniasis is an emergent zoonosis with an increasing number of new cases in Brazil where the domestic dog is an important parasite reservoir in the infectious cycle of Leishmania chagasi. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), based upon the use of a total soluble antigenic preparation of L. chagasi, was adapted for the detection of IgM antibodies in the serum of infected dogs. Optimal dilutions of the antigen, using positive and negative reference sera, were determined by checkboard titrations. The specificity and sensitivity of the ELISA were 100 %. A total of 110 serum samples were taken from dogs in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, and examined for anti-L. chagasi IgM antibody by ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT). About 25% (n=27) of all the dogs tested were found serologically positive for L. chagasi by IFAT, while 89.09% (n=98) were seropositive by ELISA. The results obtained by ELISA and IFAT were significantly different (P<0.01). The combined use of ELISA and IFAT is recommended in order to enable veterinary services to more efficiently detect canine visceral leishmaniasis.

• Leishmania chagasi diagnosis dogs IgM enzyme-linked immunosorbent assay

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Carvalho D., Oliveira T.M.F.S., Baldani C.D. & Machado R.Z. 2009. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of IgM antibodies against Leishmania chagasi in dogs. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(2):120-124. Departamento de Patologia Veterinária, Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14870-000, Brazil. E-mail: zacarias@fcav.unesp.br Visceral leishmaniasis is an emergent zoonosis with an increasing number of new cases in Brazil where the domestic dog is an important parasite reservoir in the infectious cycle of Leishmania chagasi. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), based upon the use of a total soluble antigenic preparation of L. chagasi, was adapted for the detection of IgM antibodies in the serum of infected dogs. Optimal dilutions of the antigen, using positive and negative reference sera, were determined by checkboard titrations. The specificity and sensitivity of the ELISA were 100 %. A total of 110 serum samples were taken from dogs in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, and examined for anti-L. chagasi IgM antibody by ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT). About 25% (n=27) of all the dogs tested were found serologically positive for L. chagasi by IFAT, while 89.09% (n=98) were seropositive by ELISA. The results obtained by ELISA and IFAT were significantly different (P<0.01). The combined use of ELISA and IFAT is recommended in order to enable veterinary services to more efficiently detect canine visceral leishmaniasis.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Baldani C.D., Machado R.Z., Raso T.F. & Pinto A.A. 2007. Serodiagnosis of Babesia equi in horses submitted to exercise stress. Pesquisa Veterinária Brasileira27(4):179-183. Departamento de Patologia Veterinária, Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14870-000, Brazil. E-mail: zacarias@fcav.unesp.br A complement fixation test (CFT), performed in microtitre plates, based upon the use of crude antigenic preparation of Babesia equi was adapted for the detection of antibodies in serum of infected horses. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were also used for the immunodiagnosis of B. equi. Serum samples from 15 apparently healthy horses, previously conditioned to a high-speed equine treadmill, were taken before and after exercise. All the samples analyzed were positive for B. equi infection. There were no significant differences (P<0.01) between these 3 tests, or the condition of rest or stress. The combined use of CFT and IFAT or ELISA should be recommended in order to enable veterinary services to more efficiently prevent introduction of infected horses into disease-free areas.

• Babesia equi diagnosis complement fixation indirect fluorescent antibody test enzyme-linked immunosorbent assay

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Baldani C.D., Machado R.Z., Raso T.F. & Pinto A.A. 2007. Serodiagnosis of Babesia equi in horses submitted to exercise stress. Pesquisa Veterinária Brasileira27(4):179-183. Departamento de Patologia Veterinária, Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14870-000, Brazil. E-mail: zacarias@fcav.unesp.br A complement fixation test (CFT), performed in microtitre plates, based upon the use of crude antigenic preparation of Babesia equi was adapted for the detection of antibodies in serum of infected horses. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were also used for the immunodiagnosis of B. equi. Serum samples from 15 apparently healthy horses, previously conditioned to a high-speed equine treadmill, were taken before and after exercise. All the samples analyzed were positive for B. equi infection. There were no significant differences (P<0.01) between these 3 tests, or the condition of rest or stress. The combined use of CFT and IFAT or ELISA should be recommended in order to enable veterinary services to more efficiently prevent introduction of infected horses into disease-free areas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Madruga C.R., Araújo F.R., Marques A.P.C., Carvalho C.M.E., Cusinato F.Q., Crocci A.J., Kessler R.H. & Miguita M. 2000. [Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies against Babesia bovis.] Desenvolvimento de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Babesia bovis. Pesquisa Veterinária Brasileira 20(4):167-170. Embrapa Gado de Corte, BR 262 Km 4, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for antibodies to Babesia bovis was developed and evaluated in comparison with the indirect fluorescent antibody test (IFAT). The ELISA sensitivity and specificity, estimated with 100 positive sera from cattle experimentally infected with B. bovis and 108 negative sera collected from B. bovis-free herds, were 98.0% and 98.1 %, respectively. Positive and negative predictive values were, respectively, 98.0% and 98.1 %, and precision was 98.1 %. No cross-reactions were detected with 80 sera from calves experimentally inoculated with Babesia bigemina. The ELISA was compared with IFAT using 110 cattle sera from an enzootically stable area and with 168 cattle sera from an enzootically unstable area. In both cases, there was a significant agreement between results of both tests (P=0.631 and 0.4725, respectively). In an epidemiological study performed with ELISA in the Pantanal region of the State of Mato Grosso do Sul with 1,365 cattle sera, 83.9%were positive for antibodies against B. bovis, characterizing this region as enzootically stable.

• Babesia bovis ELISA indirect fluorescent antibody test cattle epidemiological survey Pantanal Mato Grosso do Sul Brazil imunofluorescência indireta bovino levantamento sorológico Pantanal Mato Grosso do Sul Brasil.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Madruga C.R., Araújo F.R., Marques A.P.C., Carvalho C.M.E., Cusinato F.Q., Crocci A.J., Kessler R.H. & Miguita M. 2000. [Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies against Babesia bovis.] Desenvolvimento de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Babesia bovis. Pesquisa Veterinária Brasileira 20(4):167-170. Embrapa Gado de Corte, BR 262 Km 4, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. Uma prova de imunoadsorção enzimática (ELISA) para detecção de anticorpos contra Babesia bovis foi desenvolvida e avaliada em comparação à imunofluorescência indireta (IFI). A sensibilidade e especificidade do ELISA, determinadas pela análise de 100 soros positivos de bovinos infectados experimentalmente com B. bovis e 108 soros negativos colhidos de bovinos livres de infecção por este hemoparasito, foram de 98,0% e 98, 1 %, respectivamente. Os valores preditivos positivo e negativo foram, respectivamente, 98,0% e 98, 1 % e a precisão do teste foi de 9.8, 1 %. Não foram detectadas reações cruzadas com 80 soros de bezerros experimentalmente inoculados com Babesia bigemina. O ELISA foi comparado à IFI usando 110 soros de rebanhos de área de estabilidade endêmica e 168 soros de rebanhos de áreas de instabilidade endêmica. Em ambos os casos, houve concordância significativa (P=0,631 e 0,4725, respectivamente) entre os resultados demonstrados pelos dois testes. Em um estudo epidemiológico realizado com o ELISA na região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, com 1.365 soros de bovinos, 83,9% foram positivos para anticorpos contra B. bovis, caracterizando a região estudada como endemicamente estável.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Leal C.R.B., Carvalho C.M.E., Araújo F.R. & Kessler R.H. 2000. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies against Anaplasma marginale. [Avaliação de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(3):109-112. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. A rapid indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for measuring antibodies against Anaplasma marginale using a partially soluble antigen prepared from semipurified initial bodies from erythrocytes with 80.0% of rickettsiaemia. This technique utilized alkaline phosphatase and p-nitrophenyl phosphate as reaction indicators. The high sensitivity (100.0%) was confirmed with sera from 100 calves experimentally-infected with A. marginale. All of these animals showed seroconversion before or at the same time of the first rickettsiaemia or even when it was not detected. Also the elevated specificity (94.0%) was confirmed by the low percentage of cross-reactions with sera from animals experimentally-infected with Babesia bigemina and Babesia bovis (1.4 and 6.6%, respectively). Performances of ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT) with 324 sera from enzootically stable area did not show statistical difference (P>0.05), since the former showed 96.9% and the latter 97.2% of positive reactions. The advantage of this ELISA is a shorter execution time than others developed until now, allowing more samples to be analyzed.

• Anaplasma marginale ELISA serological tests cattle testes sorológicos bovino.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Leal C.R.B., Carvalho C.M.E., Araújo F.R. & Kessler R.H. 2000. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies against Anaplasma marginale. [Avaliação de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(3):109-112. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. Um ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) indireto, foi desenvolvido para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale, utilizando um antígeno parcialmente solúvel preparado a partir de corpúsculos iniciais semipurificados de eritrócitos com 80,0% de parasitemia. Esta técnica utilizou a fosfatase alcalina e o p-nitrofenil fosfato como indicadores de reação. A alta sensibilidade (100,0%) foi comprovada com soros ele 100 bezerros experimentalmente infectados com A. marginale. Todos estes animais soroconverteram antes ou ao mesmo tempo que a primeira parasitemia foi detectada, ou mesmo quando não se obteve parasitemia. A elevada especificidade (94,0%) foi confirmada pela baixa percentagem ele reações cruzadas com soros de animais infectados experimentalmente com Babesia bigemina e Babesia bovis (1,4 e 6,6%, respectivamente). Os desempenhos do ELISA e da imunofluorescência indireta (IFI) com 324 soros de uma área de estabilidade enzoótica não diferiram estatisticamente (P>0,05), uma vez que o primeiro teste detectou 96,9% de reações positivas, enquanto o segundo, 97,2%. A vantagem deste ELISA foi um menor tempo ele execução do que outros desenvolvidos até o momento, permitindo a análise de um maior·número de soros.

Abstract in English:

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of botulinum type D toxin. The double antibody sandwich ELISA was performed with reference to botulinum type D antitoxin (Statens Seruminstitut, Denmark) as in the solid phase, to sensitize plastic surface, as in the production of the immunoenzymatic conjugate. The sensitivity of ELISA was evaluated by using various dilutions of botulinum type D toxin added to liquid culture or a pool of normal bovine serum. The reactivity was, respectively, 15.6 LD50\ml and 31.2 LD50\ml for mice, with absorbance measured spectrophotometrically at 450 nm using an ELISA microreader. The specificity was demonstrated by the absence of reactivity with botulinum type A, B and E, tetanic and diphteric toxins. However, botulinum type C toxin indicated a partial cross-reactivity dueto comparable common antigenic determinants between type C and D toxins. Considering the results presented in this paper it can be concluded that the assay is particulary useful as a sensitive, fast and efficient screening method for detection of botulinum type D toxin, but it has the sarne limitations for the direct diagnosis of botulism in cattle as encountered with the bioassay in mice, because of the low concentration of circtilating toxin.

• Botulism serologic diagnostic ELISA

Abstract in Portuguese:

Foi desenvolvido um teste imunoenzimático (ELISA) capaz de detectar toxina botulínica tipo D. A técnica empregada foi a de Duplo Anticorpo (ELISA "Sandwich") utilizando-se antitoxinas botulínicas tipo D de referência (Statens Seruminstitut, Dinamarca) tanto na fase de sensibilização das microplacas de polivinilcloreto como para a produção do conjugado imunoenzimático (antisoro botulínico tipo D ligado à peroxidase). A sensibilidade do teste foi verificada através de titulações de toxina botulínica tipo D em fluidos de cultura e adicionada a "pool" de soro bovino normal, resultando em reatividade correspondendo respectivamente a 15,6 DL50\ml e 31,2 DL50\ml para camundongos, determinada espectrofotometricamente em leitor de microplacas. A especificidade, por sua vez, foi demonstrada pela ausência de reatividade com os diferentes tipos de toxinas botulínicas A, B e E, toxinas tetânica e diftérica. Entretanto, foi observado reatividade cruzada parcial com a toxina botulínica tipo C, devido às semelhanças antigênicas entre as toxinas tipos C e D. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que o referido teste pode ser utilizado como um método de triagem, sensível, rápido e eficaz para a detecção de toxina botulínica tipo D, embora, especificamente para o diagnóstico direto do botulismo do bovino, o método tem as mesmas limitações do bioensaio em camundongos por causa da baixa concentração de toxina circulante.

• Botulismo diagnóstico sorológico ELISA